Prinsipes en metoaden fan kwantitative analyze troch floeistofchromatografy

It skiedingsmeganisme fan floeistofchromatografy is basearre op it ferskil yn 'e affiniteit fan 'e komponinten yn it mingsel foar de twa fazen.

Neffens de ferskate stasjonêre fazen wurdt floeistofchromatografy ferdield yn floeistof-fêste chromatografy, floeistof-floeistofchromatografy en bonded phase chromatography.De meast brûkte binne floeistof-fêste chromatografy mei silikagel as filler en bonded phase chromatography mei microsilica as matrix.

Neffens de foarm fan stasjonêre faze kin floeistofchromatografy wurde ferdield yn kolomchromatografy, papierchromatografy en tinne laachchromatografy.Neffens de adsorpsjekapasiteit kin it wurde ferdield yn adsorpsjonskromatografy, partitionchromatografy, ionútwikselingchromatografy en gelpermeaasjechromatografy.

Yn 'e ôfrûne jierren is in hege druk floeistofstreamsysteem tafoege oan it floeistofkolomchromatografysysteem om de mobile faze rap te meitsjen ûnder hege druk om it skiedingseffekt te ferbetterjen, dus hege effisjinsje (ek wol bekend as hege druk) floeistofchromatografy ûntstien is.

DIEL
01 Prinsipe fan kwantitative analyze fan floeistofchromatografy

Om te kwantifisearjen op basis fan kwalitative, binne suvere stoffen as noarmen ferplicht;

Kwantifikaasje fan floeistofchromatografy is in relatyf kwantitative metoade: dat is, it bedrach fan 'e analyt yn it mingsel wurdt rûsd út in bekende hoemannichte suver standertmonster

DIEL
02 Basis foar kwantifikaasje troch floeistofchromatografy

It bedrach fan 'e mjitten komponint (W) is evenredich mei de antwurdwearde (A) (peakhichte of peakgebiet), W = f × A.

Kwantitative korreksje faktor (f): It is de evenredichheid konstante fan de kwantitative berekkening formule, en syn fysike betsjutting is it bedrach fan de mjitten komponint fertsjintwurdige troch de ienheid antwurd wearde (peak gebiet).

De kwantitative korreksjefaktor kin wurde krigen fan it bekende bedrach fan standertmonster en syn antwurdwearde.

Meitsje de antwurdwearde fan 'e ûnbekende komponint, en it bedrach fan' e komponint kin wurde krigen troch de kwantitative korreksjefaktor.

DIEL
03 Algemiene termen yn kwantitative analyze

Sample (sample): in oplossing mei in analyt foar chromatografyske analyze.Ferdield yn standert en ûnbekende samples.

Standert: In suver produkt mei in bekende konsintraasje.Unbekend monster (ûnbekend): It mingsel wêrfan de konsintraasje moat wurde hifke.

Samplegewicht: It orizjinele gewicht fan it te testen stekproef.

Verdunning: De verdunningsfaktor fan it ûnbekende stekproef.

Komponint: de chromatografyske pyk om kwantitatyf te analysearjen, dat is de analyt wêrfan de ynhâld ûnbekend is.

Bedrach fan komponint (bedrach): de ynhâld (of konsintraasje) fan 'e te testen stof.

Yntegeriteit: It berekkeningsproses fan it mjitten fan it pykgebiet fan in chromatografyske pyk troch in kompjûter.

Kalibraasjekromme: In lineêre kromme fan komponintynhâld fersus antwurdwearde, fêststeld fan in bekende hoemannichte standertstof, brûkt om de ûnbekende ynhâld fan 'e analyt te bepalen.

DIEL
04 Kwantitative analyze fan floeistofchromatografy

1. Selektearje in chromatografyske metoade geskikt foar kwantitative analyze:

l Befêstigje de pyk fan 'e ûntdutsen komponint en berikke in resolúsje (R) grutter dan 1,5

l Bepale de konsistinsje (suverens) fan 'e chromatografyske pieken fan' e hifke komponinten

l Bepale de deteksjelimyt en kwantifikaasjelimyt fan 'e metoade;gefoelichheid en lineêre berik

2. Stel in kalibraasjekurve mei standertmonsters fan ferskate konsintraasjes

3. Kontrolearje de krektens en krektens fan kwantitative metoaden

4. Brûk de oerienkommende software foar chromatografybehear om samplesammeling, gegevensferwurking en rapportresultaten út te fieren

DIEL
05 Identifikaasje fan kwantitative peaks (kwalitatyf)

Kwalitatyf identifisearje elke chromatografyske pyk dy't moat wurde kwantifisearre

Brûk earst it standertmonster om de retinsjetiid (Rt) fan 'e te kwantifisearjende chromatografyske pyk te bepalen.Troch de retinsjetiid te fergelykjen, fine jo de komponint dy't oerienkomt mei elke chromatografyske pyk yn 'e ûnbekende stekproef.De chromatografyske kwalitative metoade is om de retinsjetiid te fergelykjen mei it standertmonster.It kritearium Net genôchfierdere befêstiging (kwalitatyf)

1. Standert addition metoade

2. Brûk tagelyk oare metoaden: oare chromatografyske metoaden (feroarje it meganisme, lykas: gebrûk fan ferskate chromatografyske kolommen), oare detektors (PDA: spektrumfergeliking, spektrumbibliotheeksykjen; MS: massaspektrumanalyse, spektrumbibliotheeksykjen)

3. Oare ynstruminten en metoaden

DIEL
06 Befêstiging fan kwantitative Peak Consistency

Befêstigje chromatografyske pykkonsistinsje (suverens)

Soargje derfoar dat d'r mar ien mjitten komponint is ûnder elke chromatografyske pyk

Kontrolearje op ynterferinsje fan ko-eluearjende stoffen (ûnreinheden)

Metoaden foar befêstiging fan chromatografyske pykkonsistinsje (suverens)

Fergelykje spektrogrammen mei Photodiode Matrix (PDA) Detectors

Peak Purity Identifikaasje

2996 Purity Angle Theory

Kwantitative metoaden gewoanlik brûkt yn PART 07

Standert kromme metoade, ferdield yn eksterne standert metoade en ynterne standert metoade:

1. Eksterne standert metoade: meast brûkt yn floeistofchromatografy

In searje standertmonsters fan bekende konsintraasjes waarden taret mei suvere samples fan de te testen ferbiningen as standertmonsters.ynjeksje yn 'e kolom oant syn antwurdwearde (peakgebiet).
Binnen in bepaald berik is der in goede lineêre relaasje tusken de konsintraasje fan de standert stekproef en de antwurd wearde, nammentlik W = f × A, en in standert kromme wurdt makke.

Under de eksakte deselde eksperimintele omstannichheden, ynjeksje it ûnbekende stekproef om de antwurdwearde fan it te mjitten komponint te krijen.Neffens de bekende koëffisjint f kin de konsintraasje fan it te mjitten komponint krigen wurde.

De foardielen fan 'e eksterne standertmetoade:ienfâldige operaasje en berekkening, it is in gewoan brûkte kwantitative metoade;gjin needsaak foar elke komponint om te ûntdekken en te eluearjen;standert sample is fereaske;de mjittingsbetingsten fan standertmonster en ûnbekende stekproef moatte konsekwint wêze;de ynjeksje folume moat wêze presys.

Neidielen fan 'e eksterne standertmetoade:De eksperimintele betingsten binne ferplicht om heech te wêzen, lykas de gefoelichheid fan 'e detektor, de streamsnelheid en de gearstalling fan' e mobile faze kinne net feroare wurde;it folume fan eltse ynjeksje moat hawwe goede repeatability.

2. Ynterne standert metoade: akkuraat, mar lestich, meast brûkt yn standert metoaden

In bekend bedrach fan 'e ynterne standert wurdt tafoege oan' e standert om in mingde standert te meitsjen, en in searje wurknoarmen fan bekende konsintraasje wurde taret.De molêre ferhâlding fan standert oant ynterne standert yn 'e mingde standert bliuwt net feroare.Ynjeksje yn 'e chromatografyske kolom en nim (standert sample peak gebiet / ynterne standert sample peak gebiet) as de antwurdwearde.Neffens de lineêre relaasje tusken de antwurdwearde en de konsintraasje fan de wurkstandert, nammentlik W= f×A , wurdt in standertkromme makke.

In bekende hoemannichte ynterne standert wurdt tafoege oan it ûnbekende stekproef en ynjeksje yn 'e kolom om de antwurdwearde te krijen fan it te mjitten komponint.Neffens de bekende koëffisjint f kin de konsintraasje fan it te mjitten komponint krigen wurde.

De skaaimerken fan 'e ynterne standertmetoade:Tidens de operaasje wurde it stekproef en de ynterne standert byinoar mingd en yn 'e chromatografyske kolom ynjeksje, sa lang as de ferhâlding fan it bedrach fan 'e mjitten komponint oan' e ynterne standert yn 'e mingde oplossing konstant is, is de feroaring fan it samplevolumint sil gjin ynfloed op de kwantitative resultaten..De ynterne standertmetoade kompensearret de ynfloed fan it samplevolume, en sels de mobile faze en detektor, dus it is krekter dan de eksterne standertmetoade.

DIEL
08 faktoaren dy't de resultaten fan kwantitative analyze beynfloedzje

Minne krektens kin wurde feroarsake troch:

Ferkearde peakgebietyntegraasje, stekproefûntbining of ûnreinheden yntrodusearre tidens stekproeffoarming, stekproefflesje net fersegele, monster- of oplosmiddelfervluchtiging, ferkearde stekproeffoarming, problemen ynjeksje fan stekproef, ferkearde tarieding fan ynterne standert

Mooglike redenen foar minne presyzje:

Ferkearde pykyntegraasje, ynjeksje- of ynjeksjeproblemen, stekproefûntbining of ûnreinheden yntrodusearre tidens sample tarieding, chromatografyske problemen, degradearre detektorantwurd