Vloeistofchromatografy is de wichtichste metoade foar it testen fan 'e ynhâld fan elke komponint en ûnreinheden yn grûnstoffen, tuskenprodukten, tariedingen en ferpakkingsmaterialen, mar in protte stoffen hawwe gjin standertmetoaden om op te fertrouwen, dus it is ûnûntkomber om nije metoaden te ûntwikkeljen. Yn 'e ûntwikkeling fan metoaden foar floeibere faze is de chromatografyske kolom de kearn fan floeistofchromatografy, dus hoe't jo in gaadlike chromatografyske kolom kinne kieze is krúsjaal. Yn dit artikel sil de auteur útlizze hoe't jo in kolom foar floeistofchromatografy kinne kieze út trije aspekten: algemiene ideeën, oerwagings en tapassingsomfang.
A.Overall ideeën foar it selektearjen fan floeistofchromatografyske kolommen
1. Evaluearje de fysike en gemyske eigenskippen fan 'e analyt: lykas gemyske struktuer, oplosberens, stabiliteit (lykas oft it maklik is om te oksidearjen / fermindere / hydrolysearre), aciditeit en alkaliniteit, ensfh., Benammen de gemyske struktuer is de kaai faktor yn it fêststellen fan de eigenskippen, lykas de konjugearre groep hat sterke ultraviolet absorption en sterke fluorescence;
2. Bepale it doel fan analyze: oft hege skieding, hege kolom effisjinsje, koarte analyze tiid, hege gefoelichheid, hege druk ferset, lange kolom libben, lege kosten, ensfh binne nedich;
- Kies in gaadlike chromatografyske kolom: begryp de gearstalling, fysike en gemyske eigenskippen fan 'e chromatografyske filler, lykas de partikelgrutte, poregrutte, temperatuertolerânsje, pH-tolerânsje, adsorpsje fan 'e analyt, ensfh.
- Beskôgings foar it selektearjen fan floeistofchromatografyske kolommen
Dit haadstik sil de faktoaren beprate dy't moatte wurde beskôge by it selektearjen fan in chromatografyske kolom út it perspektyf fan 'e fysike en gemyske eigenskippen fan' e chromatografyske kolom sels. 2.1 Filler matrix
2.1.1 Silikagelmatrix De fillermatrix fan de measte floeistofchromatografyske kolommen is silikagel. Dit soarte fan filler hat hege suverens, lege kosten, hege meganyske sterkte, en is maklik te wizigjen groepen (lykas phenyl bining, amino bonding, cyano bonding, ensfh), mar de pH wearde en temperatuer berik it tolerearret binne beheind: de pH-berik fan de measte silikagel-matrix-fillers is 2 oant 8, mar it pH-berik fan spesjaal oanpast silikagel-bûnte fazen kin sa breed wêze as 1,5 oant 10, en d'r binne ek spesjaal modifisearre silikagel bondele fazen dy't stabyl binne by lege pH, lykas Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, dy't stabyl is by pH 1 oant 8; de boppeste temperatuerlimyt fan 'e silikagelmatrix is normaal 60 ℃, en guon chromatografyske kolommen kinne in temperatuer fan 40 ℃ tolerearje by hege pH.
2.1.2 Polymer matrix Polymer fillers binne meast polystyrene-divinylbenzene of polymethacrylate. Har foardielen binne dat se in breed pH-berik tolerearje kinne - se kinne brûkt wurde yn it berik fan 1 oant 14, en se binne mear resistint foar hege temperatueren (kinne boppe 80 ° C berikke). Yn ferliking mei silika-basearre C18-fillers hat dit type filler sterker hydrofobisiteit, en it makroporeuze polymeer is heul effektyf yn it skieden fan samples lykas aaiwiten. De neidielen dêrfan binne dat de kolom-effisjinsje leger is en de meganyske sterkte is swakker as dy fan fillers op silika-basearre. 2.2 Partikelfoarm
De measte moderne HPLC-fillers binne sfearyske dieltsjes, mar soms binne se unregelmjittige dieltsjes. Sferyske dieltsjes kinne leverje legere kolom druk, hegere kolom effisjinsje, stabiliteit en langer libben; by it brûken fan hege-viscosity mobile fazen (lykas phosphoric acid) of as de stekproef oplossing is viskeuze, unregelmjittige dieltsjes hawwe in grutter spesifyk oerflak, dat is mear befoarderlik foar de folsleine aksje fan de twa fazen, en de priis is relatyf leech. 2.3 Particle grutte
Hoe lytser de partikelgrutte, hoe heger de kolom-effisjinsje en hoe heger de skieding, mar hoe slimmer de hege drukresistinsje. De meast brûkte kolom is de 5 μm dieltsje grutte kolom; as de skiedingseask heech is, kin in 1.5-3 μm filler selektearre wurde, wat befoarderlik is foar it oplossen fan it skiedingsprobleem fan guon komplekse matrix- en multykomponentmonsters. UPLC kin 1.5 μm fillers brûke; Fillers fan 10 μm of gruttere partikelgrutte wurde faak brûkt foar semi-preparative as preparative kolommen. 2.4 Koalstof ynhâld
Koalstofynhâld ferwiist nei it oanpart fan bûnte faze op it oerflak fan silikagel, dat is besibbe oan spesifyk oerflak en bûnte fazedekking. Hege koalstof ynhâld jout hege kolom kapasiteit en hege resolúsje, en wurdt faak brûkt foar komplekse samples dy't nedich hege skieding, mar troch de lange ynteraksje tiid tusken de twa fazen, de analyze tiid is lang; lege koalstof ynhâld chromatography kolommen hawwe in koartere analyse tiid en kin sjen litte ferskillende selectivities, en wurde faak brûkt foar ienfâldige monsters dy't nedich flugge analyze en monsters dy't nedich hege aqueous faze betingsten. Algemien farieart de koalstofynhâld fan C18 fan 7% oant 19%. 2.5 Pore grutte en spesifike oerflak
HPLC-adsorpsjemedia binne poreuze dieltsjes, en de measte ynteraksjes fine plak yn 'e poaren. Dêrom moatte molekulen de poaren ynfiere om te adsorbearjen en te skieden.
Poregrutte en spesifyk oerflak binne twa komplemintêre begripen. Lytse poregrutte betsjut grut spesifyk oerflak, en oarsom. In grut spesifyk oerflak kin de ynteraksje tusken samplemolekulen en bondele fazen ferheegje, retinsje ferbetterje, sample laden en kolomkapasiteit ferheegje, en skieding fan komplekse komponinten. Folslein poreuze fillers hearre ta dit soarte fan fillers. Foar dyjingen mei hege skiedingseasken is it oan te rieden om fillers te kiezen mei in grut spesifyk oerflak; lytse spesifike oerflak kin ferminderjen werom druk, ferbetterjen kolom effisjinsje, en ferminderjen lykwicht tiid, dat is geskikt foar gradient analyze. Core-shell fillers hearre ta dit soarte fan fillers. Op it útgongspunt fan it garandearjen fan skieding, wurdt it oanrikkemandearre om fillers te kiezen mei in lyts spesifyk oerflak foar dyjingen mei hege easken foar analyse-effisjinsje. 2.6 Pore folume en meganyske sterkte
Pore folume, ek wol bekend as "pore folume", ferwiist nei de grutte fan it leechte folume per ienheid dieltsje. It kin de meganyske sterkte fan 'e filler goed reflektearje. De meganyske sterkte fan fillers mei grut poarvolumint is wat swakker as dy fan fillers mei lyts poarvolumint. Fillers mei poarvolumint minder as of lyk oan 1.5 mL / g wurde meast brûkt foar HPLC-skieding, wylst fillers mei porevolumint grutter dan 1.5 mL / g wurde benammen brûkt foar molekulêre útslutingchromatografy en leechdrukchromatografy. 2.7 Capping rate
Capping kin de tailing peaks ferminderje feroarsake troch de ynteraksje tusken ferbiningen en bleatstelde silanol groepen (lykas ionyske bining tusken alkaline ferbiningen en silanol groepen, van der Waals krêften en wetterstof ferbinings tusken soere ferbiningen en silanol groepen), dêrmei ferbetterjen kolom effisjinsje en peak foarm . Uncapped bonded fazen sille produsearje ferskillende selektiviteiten relatyf oan capped bonded fazen, benammen foar polar samples.
- Tapassingsomfang fan ferskate kolommen foar floeistofchromatografy
Dit haadstik sil it tapassingsgebiet beskriuwe fan ferskate soarten floeistofchromatografyskolommen troch guon gefallen.
3.1 Omkearde-fase C18 chromatography kolom
De C18-kolom is de meast brûkte kolom mei omkearde faze, dy't de ynhâld- en ûnreinheidstests fan 'e measte organyske stoffen foldwaan kin, en is fan tapassing op medium-polêre, swak polêre en net-polêre stoffen. It type en spesifikaasje fan C18-chromatografyske kolom moatte wurde selektearre neffens de spesifike skiedingseasken. Bygelyks, foar stoffen mei hege skiedingseasken, wurde 5 μm * 4.6 mm * 250 mm spesifikaasjes faak brûkt; foar stoffen mei komplekse skieding matrices en ferlykbere polariteit, 4 μm * 4.6 mm * 250 mm spesifikaasjes of lytsere dieltsje maten kinne brûkt wurde. Bygelyks, de auteur brûkte in kolom fan 3 μm * 4.6 mm * 250 mm om twa genotoxyske ûnreinheden yn celecoxib API te detektearjen. De skieding fan de twa stoffen kin berikke 2,9, dat is poerbêst. Derneist, ûnder it útgongspunt fan it garandearjen fan skieding, as rappe analyse fereaske is, wurdt faak in koarte kolom fan 10 mm of 15 mm selektearre. Bygelyks, doe't de auteur LC-MS / MS brûkte om in genotoxyske ûnreinens yn piperaquine fosfaat API te detektearjen, waard in kolom fan 3 μm * 2.1 mm * 100 mm brûkt. De skieding tusken de ûnreinens en de haadkomponint wie 2,0, en de deteksje fan in stekproef kin yn 5 minuten foltôge wurde. 3.2 Omkearde-fase fenylkolom
Phenylkolom is ek in soarte fan omkearde-fasekolom. Dit type kolom hat sterke selektiviteit foar aromaatyske ferbiningen. As de reaksje fan aromaatyske ferbiningen mjitten troch gewoane C18-kolom swak is, kinne jo beskôgje om de phenylkolom te ferfangen. Bygelyks, doe't ik celecoxib API makke, wie de reaksje fan 'e wichtichste komponint mjitten troch de fenylkolom fan deselde fabrikant en deselde spesifikaasje (allegear 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) sawat 7 kear dat fan 'e C18-kolom. 3.3 Normaal-fase kolom
As in effektive oanfolling op omkearde-fase kolom, normale-fase kolom is geskikt foar tige polar ferbiningen. As de pyk is noch hiel fluch by eluting mei mear as 90% aqueous faze yn de omkearde-fase kolom, en sels tichtby en oerlapet mei de solvent pyk, kinne jo beskôgje it ferfangen fan de normale-fase kolom. Dit type kolom omfettet hilike kolom, aminokolom, cyanokolom, ensfh.
3.3.1 Hilyske kolom Hilyske kolom ynbêde meastentiids hydrofiele groepen yn 'e bondele alkylketen om de reaksje op polêre stoffen te ferbetterjen. Dit soarte fan kolom is geskikt foar de analyze fan sûker stoffen. De skriuwer brûkte dit type kolom by it dwaan fan de ynhâld en besibbe stoffen fan xylose en syn derivaten. De isomeren fan in xylose-derivaat kinne ek goed skieden wurde;
3.3.2 Aminokolom en cyanokolom Aminokolom en cyanokolom ferwize nei de ynfiering fan amino- en cyanomodifikaasjes oan 'e ein fan' e bûnte alkylketen, respektivelik, om de selektiviteit foar spesjale stoffen te ferbetterjen: bygelyks aminokolom is in goede kar foar de skieding fan sûkers, aminosoeren, basen en amiden; cyano kolom hat bettere selektiviteit by it skieden fan hydrogenated en unhydrogenated strukturele ferlykbere stoffen fanwege de oanwêzigens fan konjugearre obligaasjes. Amino kolom en cyano kolom kin faak wurde oerskeakele tusken normale faze kolom en omkearde faze kolom, mar faak wikseljen is net oan te rieden. 3.4 Chirale kolom
Chirale kolom, lykas de namme al fermoeden docht, is geskikt foar de skieding en analyze fan chirale ferbiningen, benammen op it mêd fan farmaseutika. Dit type kolom kin beskôge wurde as konvinsjonele omkearde faze en normale faze kolommen de skieding fan isomeren net kinne berikke. Bygelyks, de auteur brûkte in 5 μm * 4.6 mm * 250 mm chirale kolom om de twa isomers fan 1,2-diphenylethylenediamine te skieden: (1S, 2S)-1, 2-diphenylethylenediamine en (1R, 2R)-1, 2 -diphenylethylenediamine, en de skieding tusken de twa berikte sawat 2,0. Chirale kolommen binne lykwols djoerder as oare soarten kolommen, meastentiids 1W + / stik. As der ferlet is fan sokke kolommen, moat de ienheid in foldwaande budzjet meitsje. 3.5 Ionen útwikseling kolom
Ionenwikselkolommen binne geskikt foar de skieding en analyze fan opladen ioanen, lykas ioanen, aaiwiten, nukleïnesoeren en guon sûkerstoffen. Neffens it fillertype binne se ferdield yn kolommen foar kation-útwikseling, kolommen foar anion-útwikseling, en kolommen foar sterke kation-útwikseling.
Kation-útwikselkolommen binne ûnder oaren kalzium- en wetterstofbasearre kolommen, dy't benammen geskikt binne foar de analyze fan kationyske stoffen lykas aminosoeren. Bygelyks, de auteur brûkte kalzium-basearre kolommen by it analysearjen fan calcium gluconate en calcium acetate yn in spoeloplossing. Beide stoffen hienen sterke antwurden by λ = 210nm, en de skiedingsgraad berikte 3.0; de skriuwer brûkte kolommen op wetterstof by it analysearjen fan glukose-relatearre stoffen. Ferskate wichtige besibbe stoffen - maltose, maltotriose en fruktose - hienen hege gefoelichheid ûnder differinsjaaldetektors, mei in deteksjelimyt sa leech as 0,5 ppm en in skiedingsgraad fan 2,0-2,5.
Anion-útwikselkolommen binne benammen geskikt foar de analyze fan anionyske stoffen lykas organyske soeren en halogeen-ionen; sterke kation útwikseling kolommen hawwe hegere ion útwikseling kapasiteit en selektiviteit, en binne geskikt foar de skieding en analyze fan komplekse samples.
It boppesteande is gewoan in ynlieding ta de soarten en tapassingsbereiken fan ferskate mienskiplike floeistofchromatografyskolommen kombineare mei de eigen ûnderfining fan de auteur. D'r binne oare spesjale soarten chromatografyske kolommen yn eigentlike tapassingen, lykas chromatografyske kolommen mei grutte poarjes, chromatografyske kolommen mei lytse poriën, affiniteitskromatografyske kolommen, multimode chromatografyske kolommen, ultra-hege prestaasjes floeistofchromatografyske kolommen (UHPLC), superkrityske floeistofchromatografyske kolommen ( SFC), ensfh Se spylje in wichtige rol op ferskate mêden. It spesifike type chromatografyske kolom moat wurde selektearre neffens de struktuer en eigenskippen fan it stekproef, skiedingseasken en oare doelen.
Post tiid: Jun-14-2024